Sisu

• Peamine erinevus
• I tüüpi piiranguensüümid
• II tüüpi piiranguensüümid
• Peamised erinevused

Peamine erinevus

Peamine erinevus I ja II tüüpi restriktsiooniensüümide vahel on see, et I tüüpi restriktsiooniensüümid on II tüübi restriktsiooniensüümidega võrreldes väga keerulised ja peale selle koosnevad I tüüpi restriktsiooniensüümid kolmest mitte identsest alaühikust. Teisest küljest koosnevad II tüüpi restriktsiooniensüümid kahest identsest alaühikust. Nukleaase, mis lõikavad DNA-d sisemises positsioonis, nimetatakse restriktsiooniensüümideks. Punkt, kus need restriktsiooniensüümid lõikavad DNA keskpunkti, kuid mitte lõpus. Selle restriktsiooniensüümide omaduse tõttu nimetatakse neid endonukleaasideks. Neid piiranguid nimetatakse ka molekulaarseks kääriks, molekulaarseks nugaks, molekulaarseks skalpelliks või restriktsiooniensüümiks. Äratundmiskoht või restriktsioonisait on piirkond, kus need restriktsiooniensüümid lõikavad DNA-d. Sellel restriktsioonisaidil on vähemalt 4-8 aluspaari. Neid restriktsiooniensüüme on kolm rühma, mis on järgmised:

• I tüüpi restriktsiooni endonukleaas
• II tüüpi restriktsiooni endonukleaas
• III tüüpi restriktsiooni endonukleaas

I tüüpi piiranguensüümid

I tüüpi ensüümid on mitmed alaühikud ja moodustavad modifitseerimis- ja restriktsiooniensüümide keeruka kombinatsiooni. Need ensüümid lõikavad DNA juhuslikes punktides, kuid kaugel nende äratundmisjärjestustest. Need ensüümid olid teadaolevalt väga haruldased, kuid nüüd pärast järjestatud genoomide analüüsi saime teada, et need on tavalised. I tüüpi restriktsiooniensüümid ei moodusta geelide ribade moodustumist ega eraldiseisvaid restriktsioonifragmente, seetõttu ei kasutata neid praktiliselt nii palju kui II tüüpi ensüüme, kuid neil on eriline biokeemiline tähtsus.

II tüüpi piiranguensüümid

II tüüpi restriktsiooniensüümid nende äratundmiskohas või nende äratundmiskohtade lähedal, määratletud kohtades. Peale selle toodavad nad diskreetseid geelide ribade mustrid ja eraldatud fragmente. Neil on palju praktilist väärtust ja neid kasutatakse väga sageli. Need on müügil laialdaselt saadaval. Enamik neist ensüümidest seondub DNA-ga homodimeeridena ja nad tunnevad ära ka sümmeetrilised DNA järjestused. Mõned neist restriktsiooniensüümidest tunnevad ära ka asümmeetrilisi DNA järjestusi, kuna nad seostuvad heterodimeeridena. Mõned ensüümid tunnevad ära ka järjestusi, mis on pidevad. Nendes järjestustes on äratundmisjärjestuse kõrval kaks poolkohta. Mõned neist ensüümidest tunnevad ära ka katkendlikud järjestused, milles pooled saidid on üksteisest eraldatud. DNA-s toimuv lõhustumine jätab ühele küljele 5 fosfaati ja teisele küljele 3 hüdroksüüli. Need on väiksemad alamühikutega, mis jäävad vahemikku umbes 200-350. Kõige tavalisemad II tüüpi ensüümid on tüüp IIS. Nad lõhenevad väljaspool oma äratundmiskohta ühele küljele. Need on normaalse suurusega ja tunnevad ära asümmeetrilisi ja pidevaid järjestusi. Neil on kaks domeeni, üks DNA jaoks ja teine ​​DNA lõhustamiseks. Enamasti seovad nad DNA-d monomeeridena. DNA ahelad, mis sisaldavad erinevaid äratundmiskohti, II tüüpi äratundmisensüümid, on nende suhtes väga aktiivsed. Teine II tüüpi ensüümide tüüp on IIG tüüp. Neil on restriktsiooni- ja modifitseerimisensüümid, pealegi on nad suured.

Peamised erinevused

1. I tüüpi restriktsiooniensüümid on II tüüpi restriktsiooniensüümidega võrreldes keerukamad.
2. I tüüpi äratundmisensüümid koosnevad kolmest mitte identsest alaühikust. II tüüpi äratundmisensüümid koosnevad kahest identsest alaühikust.
3. I tüüpi restriktsiooniensüümide molekulmass on 400000 daltonit. II tüüpi restriktsiooniensüümide molekulmass on 20 000 kuni 100 000 daltonit.
4. I tüüpi restriktsiooniensüümide lõikamiskoht on 1000 nukleotiidi eemal äratundmiskohast. II tüüpi restriktsiooniensüümide lõikamiskoht asub samas äratundmiskohas.
5. Lõikamise järjestus on I tüüpi restriktsiooniensüümide puhul mittespetsiifiline. Lõikamise järjestus on spetsiifiline II tüüpi restriktsiooniensüümide puhul.
6. I tüüpi ensüümid vastutavad DNA kaitsmise eest metüleerimise teel ja II tüüpi ensüümidel puudub metüleerimise aktiivsus.
7. I tüüpi ensüümide aktiveerimiseks on vaja ATP, Mg2 + ja adenosüülmetioniini. II tüüpi ensüümide aktiveerimiseks on vajalik ainult Mg2 +.
8. I tüüpi ensüümil on mõlemad endonukleaasi ja metülaasi aktiivsus. II tüübil on ainult restriktsiooni aktiivsus, sellel puudub endonukleaasi ega metülaasi aktiivsus.
9. I tüüpi ensüümid tuvastati enne II tüüpi ensüüme.
10. I tüüpi identifitseeriti kahes erinevas E.Coli tüves.
11. I tüüpi ensüümide näideteks on Ecok ja EcoB. II tüüpi ensüümide näideteks on Hind II ja EcoRI.